কিভাবে একটি জিন বন্দুক ব্যবহার করতে

1. উপাদান প্রস্তুতি

মাঝারি একটি পাতলা স্তর 9 সেমি 2 সংস্কৃতির ডিশে রাখা হয়েছিল এবং উপাদানটি (সাধারণত অপরিচিত ভ্রূণ, পরিপক্ক ভ্রূণ, ছোট কলাস, সাসপেনশন কোষ, প্রোটোপ্লাস্ট ইত্যাদি) থালাটির মাঝখানে 3 সেন্টিমিটার ব্যাসের সাথে ধাতুপট্টাবৃত ছিল। ।

2, স্বর্ণ গুঁড়া চিকিত্সা

60 সেন্টিমিটার সোনার গুঁড়া বা টংস্টেন গুঁড়া এক সেন্ট্রিফিউজ নল থেকে নিন, 1 মিমি নিখুঁত ইথানল যোগ করুন, 3 মিনিটের জন্য ভালভাবে ঝাঁকুন, 9615g এ 1rain এর জন্য সেন্ট্রিফিউজ করুন, সুপার্নেণ্ট্যান্টটি মুছে ফেলুন, 1 মিমি স্টেরাইল ওয়াটার যোগ করুন এবং ভাল মিশ্রিত করুন, 9615g এ সেন্ট্রিফিউজ, উপরের ধাপ 3 টি পুনরাবৃত্তি করুন। টাইমস। অবশেষে, সোনার গুঁড়াটি 1 মিলে নির্বীজিত নিঃসৃত পানিতে সাসপেন্ড করা হয় এবং 4 'C বা কক্ষ তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা হয়।

3, ডিএনএ প্রক্রিয়াকরণ

50tA সোনার গুঁড়া সাসপেনশন নিন, 5 র্থ প্লাসমিড ডিএনএ যোগ করুন (1.0 / lg ~ 1) সমাধান, 50 // l

0.1 এমওল / এল শুক্রাণু (ব্যবহার করা সমাধানটি নির্বীজিত-নির্বীজিত ছিল), 3 মিনিটের জন্য ঝাঁকানো, 10 মিনিটের জন্য রুমের তাপমাত্রায় বামে, 10 মিটারের জন্য 9615 গ্রামে সেন্ট্রিফুগেড করা, সুপার্নট্যান্টকে ছাড়িয়ে যাওয়া; 250 ~ 1 নিখুঁত ইথানল যোগ করুন, 10 সেকেন্ডের জন্য 9615 গ্রাম এ সেন্ট্রিফিউজকে চেপে ধরুন এবং সুপারারট্যান্ট বাতিল করুন। পেলেটটি মোট ইথানলের 60/1 টিতে পুনরায় বসানো হয়েছিল এবং 5 শট (10 থেকে 1 শট প্রতি) ব্যবহার করা হয়েছিল।

4, জিন বন্দুক অপারেশন

জিন বন্দুকের সমস্ত ক্রিয়াকলাপ নিম্নরূপঃ অস্থির অবস্থার অধীনে সম্পাদিত হয়:

1) 70% ইথানল দিয়ে জিন বন্দুক এবং নমুনা চেম্বার পৃষ্ঠটি নির্মূল করে। একই সময়ে, বাধা নেট এবং ক্ল্যায়েবল ডিস্ক, মাইক্রো ইলাস্টিক ক্যারিয়ার, তার ধারক এবং ফিক্সিং টুলটি 70% ইথানল দিয়ে 15 মিনিটের জন্য ভেজানো হয়, এবং তারপর শুকানোর জন্য পরিষ্কার বেঞ্চে রাখা হয়। Splittable diaphragm, নির্দিষ্ট কভার, এবং মাইক্রো-ইলাস্টিক ক্যারিয়ার লঞ্চ করার যন্ত্রটি 70% ইথানল দিয়ে শুকিয়ে যায় এবং শুকিয়ে যায়।

2) মাইক্রোপার্টিক স্লাইডটি ধরে রাখার রিংটিতে ঢোকান এবং মাইক্রোপার্টিক স্লাইডের কেন্দ্রটিতে ডিএনএ এবং সোনার গুঁড়া মিশ্রণ যুক্ত করুন এবং প্রায় 1 মিনিটের জন্য শুকিয়ে নিন।

3) তার ধারক উপর rupturable ঝিল্লী ইনস্টল করুন এবং এটি ঘন ঘন গ্যাস accelerator সম্মুখের চালু।

4) স্পেস রিং, ব্লকিং নেট, ব্লকিং নেট হোল্ডার, কণা ক্যারিয়ার এবং ফিক্সিং রিং (কণাগুলির মুখোমুখি মুখোমুখি), কভারটি শক্ত করে ইনস্টল করুন এবং এটি দখল করুন।

5) নমুনা চেম্বার নমুনা রাখুন এবং দরজা বন্ধ।

6) হিলিয়াম সিলিন্ডারের প্রধান ভালভ খুলুন এবং হিলিয়াম রেগুলেটর ভালভকে ঘড়ির কাঁটার দিকে ঘুরিয়ে দিন যাতে চাপ গেজ পয়েন্টারের নির্দেশ ডায়াফ্র্যাগ চাপ 200Psi (= 1.379MPa) এর চেয়ে বেশি।

7) জিন বন্দুক এবং ট্রান্সফরমার সুইচ চালু করুন।

8) ভ্যাকুয়াম বোতাম টিপুন। যখন ভ্যাকুয়াম 26-28 এইচজি (= 88.05 ~ 94.82kPa) হয়, তখন দ্রুত হোল বোতামটি টিপুন, তারপরে লঞ্চ বাটন চেপে ধরে রাখুন এবং এটি সক্রিয় না হওয়া পর্যন্ত ধরে রাখুন।

9) ভ্যাকুয়াম টেবিল শূন্য হয়েছে পরে নমুনা রিসেট করার জন্য ভেন্ট কী টিপুন।

10) বন্ধ করুন।

হিলিয়াম সিলিন্ডারের প্রধান স্যুইচটি টাইটেন, খালি বন্দুক আঘাত করুন, চাপের গেজের পয়েন্টারটি শূন্যে ফিরিয়ে দিন, তারপর চাপ গেজ সমন্বয় ভালভকে ঘন ঘন ঘোরান; জিন বন্দুক এবং ট্রান্সফরমার সুইচ প্রধান সুইচ বন্ধ করুন।