ভাঙা কোষ সম্পর্কে প্রায়শই জিজ্ঞাসিত প্রশ্ন

1. ই। কোলি বিদেশী প্রোটিন প্রকাশ। Sonicated যখন, এটা পিবিএস 1% Triton-X-100 ধারণকারী স্থগিত করা হয়। আল্ট্রাসাউন্ড প্রভাব ভাল। 1% Triton-X-100 এর প্রভাব এখনও সুস্পষ্ট। কিছু অন্যান্য ব্যাকটেরিয়া এছাড়াও স্ট্রিপ্টোমিসেসের মতো কাজ করে। Recombinant প্রোটিন প্রকাশ করার পরে, কক্ষগুলি অতিস্বনক সেল বিঘ্ন দ্বারা বিরত ছিল, একটি বরফ স্নান, 400w, এবং 1s জন্য 2s জন্য কুঁচিতকরণ ব্যবহার করে, কিন্তু অল্প সময়ের মধ্যে একটি বড় পরিমাণে ফেনা উত্পন্ন হয়েছিল, যা নিষ্পেষণ ক্ষমতা প্রভাবিত। উভয় pbs এবং tris বাফার এই মত ছিল। ফ্র্যাগমেন্টেশন অসম্পূর্ণ, এবং লক্ষ্যহীন প্রোটিন এই অবিচ্ছেদ্য কোষে, আমি কি করব?

বিশ্লেষণ: প্রোব অবস্থান ভাল স্থাপন করা হয় না, কারণ বুদ্বুদ উত্পন্ন করা হবে; তদন্তটি প্রায় 0.5-1 সেমি কাছাকাছি, কাছাকাছি হতে হবে; ক্ষমতা উপকরণ অনুযায়ী পরিবর্তিত হবে, কিন্তু তরল স্তরের পালন করা যেতে পারে, আপত্তিকর কিন্তু খুব শক্তিশালী নয়; আপনি অতিস্বনক কোষ চয়ন করতে পারেন পেষণকারী 10s জন্য 3s জন্য ভাঙ্গা এবং 20-30 বার ভাঙা হয়। শিং অবস্থান এছাড়াও উল্লেখ করা উচিত। যদি শব্দটি ভুল হয় তবে এটি সময়ের সাথে সামঞ্জস্য করা উচিত; ব্যাকটেরিয়া ঘনত্ব বিবেচনা। নিষ্পেষণ যখন ভলিউম বৃদ্ধি করার চেষ্টা করুন, Zui শক্তি 60% অতিক্রম করা উচিত নয়; কিছু জীবাণু প্রোটিনের জন্য 8 সেকেন্ডের 8 সেকেন্ড বিরতির চেষ্টা করুন, প্রোটিনকে ডুবে যাওয়া প্রোটিনকে বুদবুদ উৎপাদনের কারণকে হ্রাস করা কঠিন, যা একটু বেশি সময়ের জন্য বিরতিতে পারে। অন্তর্ভুক্ত প্রোটিন ফর্ম পাওয়া একটি প্রোটিন।

স্ট্রিপ্টোমিসিস (অ্যাক্টিনোমাইসিটিস) এর sonication জন্য কি শর্ত আছে?

বিশ্লেষণাত্মক: অ্যাক্টিনোমাইকেটগুলি প্রোক্যারিওটিক সিস্টেমের ফায়োলজেনেটিক গাছের গ্র্যাম-পজিটিভ (ইব্যাকটিরিয়া) শাখা গোষ্ঠীর (জি + সি) মোল্লার শতাংশ (এমওল%) এর অন্তর্গত, যার মধ্যে আণবিক এবং জৈবিক বৈশিষ্ট্য প্রোক্যারিয়োটগুলির জন্য অনন্য। যাইহোক, তার বিভিন্ন গ্রুপে, সেল প্রাচীর রাসায়নিক গঠন ব্যাপকভাবে পরিবর্তিত হয়। ই। কোলি আল্ট্রাসাউন্ডে, 400W ব্যবহার করা হয় এবং 5s এর জন্য 5s ভাঙার পদ্ধতিটি কার্যকরী, তবে এটি স্ট্রিপ্টোমিসেসে ব্যবহৃত হয় এবং এটি সেল প্রাচীর গঠনের পার্থক্যের কারণে কোনও প্রভাব ফেলে না। স্ট্রিপ্টোমিসিস (অ্যাক্টিনোমাইসিটিস) এর প্রাক-চিকন চিকিত্সা সাধারণত ব্যাকটেরিয়া স্থগিতাদেশের নির্দিষ্ট ঘনত্বের জন্য কনফিগার করা হয়। অতিস্বনক সেল বিভাজক ব্যবহার করে পেষণকারী জন্য নির্দিষ্ট শর্ত হল: 24 ঘন্টা সংস্কৃতি সমাধান ব্যাকটেরিয়া সংগ্রহ 5000 র / মিনিট সেলস সংগ্রহ 5 মিনিট জন্য; একটি পিএইচ 7.5 Na2HPO -NaH2PO বাফার দিয়ে 3 বার ধোয়া, এবং তারপর কোষগুলি বাফার ব্যবহার করে 1: 3 ব্যাকটেরিয়া সাসপেনশন প্রণয়ন করা হয়। একটি 40 এমএল বড় প্লাস্টিক পরীক্ষা টিউব স্থাপন; একটি বরফ স্নানের মধ্যে বড় প্লাস্টিকের পরীক্ষা টিউব রাখুন এবং একটি অতিস্বনক কোষ বিপর্যয় (পাওয়ার 200W, 1/2 "প্রোব, 30 সেকেন্ডের জন্য ক্রাশ, 30 সেকেন্ডের মধ্যে) দিয়ে ক্রাশ করুন; 12 000 র / মিনিটে সমাধান নিষ্পেষণ 30 এর জন্য উচ্চ গতিতে সেন্ট্রিফিউজ মিনি, সেল সেলিব্রিটি এবং সুপার্ন্যান্ট্যান্ট সংগ্রহ করুন। ওয়াশ কোষগুলি পিএইচ-এ প্রাক-শীতল সালাইন বা ট্রিস-এইচসিএল একবার একবার ধুয়ে যেতে পারে। এছাড়া, অতিস্বনক ডোজ নমুনা এবং ব্যাকটেরিয়া পরিমাণে পরিবর্তিত হয়। শক্তি 400- 600 ওয়াট, 5 সেকেন্ডের জন্য চূর্ণ, 5 সেকেন্ড, বরফ স্নান এবং 1 মিমি পিএমএসএফ এর চূড়ান্ত ঘনত্ব যুক্ত করা হয়েছে। যথাযথ অতিস্বনক তীব্রতা এবং ফ্রিকোয়েন্সি নির্ধারণ করার জন্য ব্যাকটেরিয়া যে কোনও সময়ে সম্পূর্ণ ভাঙা কিনা তা পরীক্ষা করা প্রয়োজন।